液相色谱是应用最多的色谱分析方法，液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳；进样系统要求进样便利切换严密；由于液体流动相粘度远远高于气体，为了减低柱压液相色谱的色谱柱一般比较粗，长度也远小于气相色谱柱。HPLC应用非常广泛，几乎遍及定量定性分析的各个领域。

　　

　　使用液相色谱时，液体待检测物被注入色谱柱，通过压力在固定相中移动，由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同，不同的物质顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，最后通过分析比对这些信号来判断待测物所含有的物质。液相色谱作为一种重要的分析方法，广泛的应用于化学和生化分析中。液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别，它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和微粒固定相，适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。

 

　　液相色谱系统常见故障及应对措施：

　　1、柱压高：

　　原因：缓冲液盐分沉积于柱内；或者是样品污染沉积。

　　措施：如果是缓冲液盐分沉积于柱内，则用40～50℃的纯水低速正向冲洗柱子，逐渐提高流速冲洗，柱压大幅度下降后再用常温纯水清洗，最后用纯甲醇冲洗柱子30分钟。

　　如果是样品污染沉积导致，则用纯水反向冲洗柱子，再用甲醇冲洗，随后用甲醇+异丙醇（4+6）冲洗柱子，再用甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，最后用甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟。

　　

　　2、气泡溢出：

　　原因：主要是由于过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内，内部霉菌繁殖形成菌团阻塞了过滤器导致。

　　措施：将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，利用超声清洗既分钟。或者将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小时，再用纯水清洗，打开purge键清洗脱气，直到没有气泡冒出。打开泄压阀，打开泵，纯水冲洗过滤器1小时左右。

　　

　　3、无压力指示，也无液体流过：

　　原因：泵密封垫圈磨损；或大量气泡进入泵体。

　　措施：更换密封垫圈，或用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。

　　

　　4、压力波动大，流量不稳定：

　　原因：系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物。

　　措施：观察流动相的量，动相要充分脱气。如果是单向阀和阀座不能密封，则拆下单向阀,放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。

　　

　　5、峰面积重复性不佳：

　　原因：进样阀漏液；或加样针不到位，或者是液量不足。

　　

　　6、出峰不佳，峰分叉：

　　原因：色谱柱被污染，或者柱头填料塌陷。

　　措施：色谱柱被污染则需清洗色谱柱。如果柱头填料塌陷或硬结，则去除硬结部分，冲新装入新填料。反复滴甲醇，压紧不锈钢杆，直至填满。柱头用甲醇冲洗干净。